cy3 se -九游会ag

1. 产品简介：

      菁染料是性能优良的荧光标记染料，摩尔吸光系数在荧光染料中是最高的，其琥珀酰亚胺酯是最常用的脂肪氨基标记试剂，广泛用于蛋白、抗体、核酸及其他生物分子的标记和检测。通过改变次甲基链的长度, 可改变其荧光发射波长，每增加一个双键，按照huoffman规则正好红移约100nm。

菁染料cy3和cy5已成为基因芯片的首选荧光标记物;另外,cy5, cy5.5和cy7的吸收在近红外区背景非常低，是荧光强度最高、最稳定的长波长染料。特别适合于活体小动物体内成像代替放射性元素。其中本公司的cy3 se的商标名称safered，未经授权严禁使用！

2. 菁染料琥珀酰亚胺酯（cydye nhs）的标记

菁染料和生物分子的比例f/p=4～12之间荧光强度最高，f/p值过高荧光探针会自我淬灭并影响生物分子的生物活性，标记生物分子最好是用单琥珀酰亚胺酯，但是用双修饰的cydye nhs并没有发现交联。cydye nhs标记抗体在ph (8.5～9.4)时10分钟f/p可达5～6，而在ph 7.0几乎不反应。我们用不同比例的cy3标记anti-glutathione-s-transferase (gst)多克隆抗体发现用1:1, 5:1, 10:1 和20:1标记时得到的f/p值分别是0.28:1, 1.16:1, 2.3:1 和4.6:1。

3. 操作步骤

3.1 水溶性cy3 nhs标记anti-gst多克隆抗体

   市场上买到的抗体如果含有其它蛋白（例如serum albumin或gelatin等）或带氨基的缓冲液会影响标记，在标记前需纯化。

1. 在1 l 0.15 m nacl 溶液中透析anti-gst抗体(浓度为0.5 ml at 3 mg/ml)，常温透析4小时。

2. 在4°c用新鲜的1 l 0.15 m nacl 溶液再透析过夜。

3. 第二天用1 l 0.1 m nahco₃(ph 8.3)透析4小时。

4. 用0.22 μm注射器过滤头过滤抗体溶液。

5. 用0.1 m nahco₃稀释少量的抗体，在280nm处测其紫外吸收值计算标记抗体的总量（igg antibody摩尔吸光系数170 000 m^-1cm^-1at 280 nm). 

6. 用dmso配置cy3 nhs (mw 765.95)溶液浓度为10 mg/ml；计算所需体积以得到想要的cydye nhs 和抗体的比值(例如20:1)，然后慢慢将其加入到抗体溶液中，同时在暗处常温缓慢搅拌45分钟。

7. 用1 l 0.15 m nacl 溶液常温避光透析4小时除去未标记上的cy3。

8. 在4°c用新鲜的1 l 0.15 m nacl 溶液再避光透析过夜。

9. 用1 l of 0.01 m pbs/ 0.01% 叠氮化钠溶液常温避光透析4小时, 在4°c常温避光再次透析过夜。

10. 用0.22 μm注射器过滤头过滤抗体溶液。

11. 用0.01 m pbs/0.01 % 叠氮化钠整数倍稀释标记抗体溶液，测量280nm（蛋白）和552nm（cy）处的紫外可见吸光度。

12. 产品冷冻干燥成粉末或在0.01 m pbs/ 0.01% 叠氮化钠溶液中，-20℃避光储存。

f/p计算：

cy3在552nm摩尔吸光系数为150 000 m^-1cm^-1；此蛋白在280nm的摩尔吸光系数为170 000 m^-1cm^-1；不同蛋白的摩尔吸光系数不一样；.cy3 染料本身在280 nm 的吸收是552nm处的8%。按以下公式计算f/p值。

[cy3] = a₅₅₂/150000

[antibody] = {a₂₈₀- (0.08×a₅₅₂)}/170000 

f/p _final= [cy3]/[antibody]= {1.13×a₅₅₂}/ {a₂₈₀- (0.08×a₅₅₂)}

• 九游会ag-九游会登录