super green i 核酸染料(10,000× dmso溶液)（电泳级）效果同sybr green -九游会ag

super green i（效果同sybr green）核酸染料

本品用 dmso 溶解，因为 dmso 溶点是 18.3℃，使用前请放置到室温充分溶解。

super green i  核酸染料特点：

1.    无毒性：花菁染料，无致癌毒性。

2.    高灵敏：紫外凝胶透射仪下灵敏度高 eb 染色法 5-10 倍，可见光透射仪下的灵敏度比 eb 染色法高20~30 倍。

3.    信噪比高：样品荧光信号强，无背景信号。

4.    操作简单：无须脱色或冲洗，即可用紫外凝胶透射仪观察或可见光透射仪观察。

5.    适用范围广：可适用于多种电泳分析，如琼脂糖凝胶电泳和 page 凝胶电泳。

6.    使用方便：不影响其它修饰酶作用(如：taq 酶、内切酶、t4 连接酶、反转录酶等)。

super green i  核酸染料使用方法：

1.胶染法(用法同eb)(推荐方法，见图1)

1)   制胶时加入 super green i  核酸染料。冷却胶到 50℃左右，每 100ml 胶中加入1-3µl sybr green i 核酸染料（见图 1）。

2)   按照常规方法进行电泳即可。

3)   用紫外凝胶透射仪或可见光透射仪观测。蓝光可透过玻璃， 观测聚丙烯酰胺凝胶时，可直接将托有凝胶的玻璃平皿放入可见光透射仪内观测。

*注：此方法染色能准确确定片段分子量且用量较少。1ml 染料可以做 1000 块10 ml 胶，每块胶点 50 个样，可做 50000 次。

2.点染法(见图3) 

1)   该方法适于琼脂糖凝胶电泳和page凝胶电泳。

2)   工作液的配制：用电泳缓冲液将10000×的super green i 稀释100倍，即为super green i 工作液。super green i 工作液可以置2～8℃保存一个月以上, 浓缩液在-20℃保存半年。

3)   制胶：按常规方法制胶，不含任何染料。

4)   样品染色：向分析样品中加入super green i工作液和载样缓冲液，室温放置10分钟，使super green i与样品中dna充分结合。super green i 工作液加入量为总上样量的1/5～1/10。

5)   dna marker染色：将5μl dna marker、5μl dna marker稀释液和1μlsuper green i 工作液混匀，室温放置5分钟，使super green i 与dna充分结合。

6)   上样、电泳：按常规操作。用紫外凝胶透射仪或可见光透射仪观测。蓝光可透过玻璃， 观测聚丙烯酰胺凝胶时，可直接将托有凝胶的玻璃平皿放入可见光透射仪内观测。

*注：用点染法染色时，灵敏度最高，染料用量最少。通常点一个样加入 1µl 即 可，可以使用 10000 次, 但大片段稍有滞后现象，如果需要更准确确定分子量(与marker 对比)，建议使用胶染法。

3.泡染法

1)   按照常规方法进行制胶，其中不含任何染料。

2)   用 ph 7.0 - 8.5  的缓冲液(如：tae, tbe)，按照 1﹕1000 的比例稀释 sybr green i

3)   核酸染料，混匀，制成染色溶液。

4)   将染色溶液倒入合适的聚丙烯容器中，放入凝胶，用铝箔等盖住容器使染料避光。 室温振荡染色 10-30 分钟，染色时间因凝胶浓度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝胶直 接在玻璃平皿上染色，将配好的稀释溶液轻轻地倒在胶板上，让稀释液均匀地覆 盖整个胶板，并染色 30 分钟。玻璃平皿必须预先经过硅烷化溶液处理（避免染料 吸附在玻璃表面上）。

5)   用紫外凝胶透射仪或可见光透射仪观测。蓝光可透过玻璃， 观测聚丙烯酰胺凝胶时，可直接将托有凝胶的玻璃平皿放入可见光透射仪内观测。

*注：用泡染方法染色时，可以精确确定核酸片段分子量。但染料用量是三种方法中用量最大的。

几种染色方法特点比较:

super green i  核酸染料使用注意事项：

1.    super green核酸染料样品点染方法中，电泳不要超过 2 小时，以免核酸染料从 dna/rna 上分离出来，产生弥散状条带。

2.    用点染方法染色时，条带稍有滞后现象，如果需要确定片段精确分子量（和 marker 对比），建议用胶染法和泡染法。

3.    常规用酒精沉淀核酸过程中，super green i  核酸染料可以全部从核酸上去掉。

4.    dna电泳请选择 sybr green i 染料，rna 电泳请选择 sybr green ii染料，两种染料不通用。

5.    super green i 核酸染料对玻璃和非聚丙烯材料具有一定亲合力。建议在稀释、贮存、染 色等使用过程中用聚丙烯类容器。

6.    可以加orange red 作为标记. ph值在7.5-8.3之间,不要微波加热,加入热胶的温度低于50度

          super green i  核酸染料不同使用方法电泳图谱：

                           eb     super green i dna stain                                                    eb     super green i

  fig.1胶染法fig.1 dna marker 2000 10, 5, 2.5 per lane             fig.2胶染点染 fig.2 dna marker 2000 incubate at rt for 3~5min

                  eb    super green i dna stain                                                            eb      super green ii rna stain

 fig3. 点染法fig.3 volume ration of dye/dna marker 2000               fig.4 incubate at rt for 3~5min then load 0.5,1,1ug  per lane

=1:10 incubate at rt for 3~5min then load 5,2,1ul per lane.             fig4. sybr green ii点染(rna)

• sybr green核酸染料说明书